সুপেরিয়র পিসিআর ফলাফলগুলির জন্য কি প্রয়োজন তা খুঁজে বের করুন

01 পরিষ্কার ল্যাবরেটরি শর্তাবলী

যেহেতু পিসিআরটি ডিএনএর একটি একক অণুর সন্ধান করতে সক্ষম তাই ল্যাবরেটরীতে প্রাথমিক অবস্থার বজায় রাখা গুরুত্বপূর্ণ। সবসময় তাজা গ্লাভস পরুন, জারিত কাচপাত্র, টিউব এবং pipette টিপস এবং নির্বীজ সমাধান ব্যবহার করুন, এবং কাজ শুরু করার আগে কাজের এলাকা পরিষ্কার।

সর্বদা সঠিক প্রতিক্রিয়া অন্তর্ভুক্ত, টেমপ্লেট ডিএনএ ছাড়া এবং এনজাইম ছাড়া, ফলাফল সত্যিই সঠিক নমুনা বিবর্ধনের কারণে নিশ্চিত করতে।

বেশিরভাগ লোকই তাদের নিজস্ব সেট সমাধান নিশ্চিত করে থাকেন যে সমস্যা সমাধান সহজে ভাগ না করা এবং মনোনীত pipettes প্রায়ই PCR- এর জন্য একপাশে রাখা হয়। DNase এবং RNase- মুক্ত PCR টিউব, এরিসোল-প্রতিরোধী pipette টিপস এবং UV আলো সঙ্গে একটি ধূমকেতু হুড কাজ করেও সমস্যা কমানোর উপায়।

02 রাসায়নিক উপাদান

• 18 থেকে 24 ভিত্তি আছে
• কোন দ্বিতীয় গঠন আছে (অর্থাত, hairpin loops)
• জি / সি এবং এ / টি জোড়া সুষম বন্টন আছে
• 3-ফুট শেষ পর্যন্ত একে অপরের পরিপূরক নয়
• গলে যাওয়া তাপমাত্রা (টিএম) সম্পর্কে 5-10 ডিগ্রী সেলেসিয়াস নীচের তাপমাত্রা, যা সাধারণত 55 এবং 65 ডিগ্রি সেলসিয়াসের মধ্যে থাকে

উভয় primers জন্য Tm এছাড়াও ভাল ফলাফলের জন্য অনুরূপ হওয়া উচিত।

03 প্রতিক্রিয়া মিক্স: টেমপ্লেট এবং প্রাইমারস

অনুকূল প্রাইমার ঘনত্ব 0.1 এবং 0.6 মাইক্রোমোলি / এল এর মধ্যে। টেমপ্লেট পরিমাণ ডিএনএ (মানব, ব্যাকটেরিয়া, প্লাজমড) এর ধরনের উপর নির্ভর করে পরিবর্তিত হয়।

টেমপ্লেট খুব কম পরিমাণে, ফলাফল উন্নত করতে অন্যান্য কৌশল আছে, যেমন চাকা সংখ্যা বা "গরম শুরু" ব্যবহার। সর্বদা একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ প্রতিক্রিয়া সঙ্গে নতুন প্রাইমার পরীক্ষা, তারা আপনার নির্দিষ্ট পরীক্ষামূলক অবস্থার অধীনে কাজ নিশ্চিত হতে।

04 প্রতিক্রিয়া মিক্স: এনজাইম কার্যকলাপ

প্রতিক্রিয়া মিশ্রিত MgCl2 এর ঘনত্ব PCR ফলাফল প্রভাবিত করতে পারে এবং আরও দ্রুতগতিতে প্রতিক্রিয়াগুলির মধ্যে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করতে পারে। ম্যাগনেসিয়াম cation পলিমেরেজ এনজাইম সনাক্ত করে যে প্রকৃত স্তর উত্পাদন করতে DNTPs সঙ্গে দ্রবণীয় কমপ্লেক্স ফর্ম।

সমস্ত চারটি ডিএনটিপিগুলি সমান পরিমাণে পলিমেরেজ ত্রুটি হার কমাতে সাহায্য করে। বিটেইন, বিএসএ, ডিটারজেন্ট, ডিএমএসও, গ্লিসারোল, এবং পাইরোফসফ্যাটেজের মতো কিছু সংযোজনও এনজাইম নির্দিষ্টতা বা প্রতিক্রিয়ার কার্যকারিতা প্রভাবিত করতে পারে।

05 থার্মোসি ক্ল্লারের ধরন

ল্যাবরেটরি সরঞ্জামের জন্য কেনাকাটা করার সময়, মনে রাখবেন যে কিছু তাপস্থল সঠিক, পছন্দসই তাপমাত্রা বজায় রাখতে অন্যান্য তুলনায় কম সুনির্দিষ্ট।

এটি এমন একটি এলাকা যেখানে সস্তায় যাওয়া দীর্ঘ সময় ধরে বন্ধ হয় না যখন আপনি একটি চটকদার প্রতিক্রিয়া সম্মুখীন হয় বা primers ব্যবহার করে যা annealing তাপমাত্রা একটি সংকীর্ণ পরিসীমা প্রয়োজন

আপনি ব্যবহার করছেন thermocycler সুনির্দিষ্ট ব্র্যান্ড মাপসই পরিকল্পিত পাতলা- walled প্রতিক্রিয়া টিউব, এছাড়াও অনুকূল প্রতিক্রিয়া তাপমাত্রা সাহায্য।

06 সাইকল সেটিংস

আরও টেমপ্লেট বাড়ানোর জন্য কম এনজাইম ক্ষতিপূরণ জন্য প্রতি 20 চক্র সম্পর্কে এক্সটেনশন সময় বৃদ্ধি দ্বারা বৃদ্ধি ফলিত করা সম্ভব। সাধারণত, 40 টিরও কম চক্র 10 টিরও কম টেমপ্লেট অণুকে এথিডিয়াম ব্রোমাইড-দাগযুক্ত agarose gel- তে দেখতে যথেষ্ট পরিমাণে একটি ঘনত্বের জন্য যথেষ্ট।