ডিএনএ সংযোজন এবং আম্পায়ারিং জেনেসিসের সাথে কি পিসিআর কি করতে হবে?
পলিমেরেজ চেইন রিঅ্যাকশন ( PCR ) হল একটি জিনের একাধিক অনুলিপি করার জন্য আণবিক জেনেটিক টেকনিক এবং এটি জিন সিকোয়েন্সিং প্রক্রিয়ার অংশ।
কিভাবে পলিমারেজ চেন রিঅ্যাকশন কাজ করে?
ডিএনএ একটি নমুনা ব্যবহার করে জিন কপি তৈরি করা হয়, এবং নমুনা পাওয়া জিন এক একক কপি থেকে একাধিক কপি করতে প্রযুক্তি ভাল। লক্ষ লক্ষ কপি তৈরি করার জন্য জিনের পিসিআর এক্সপ্লিফিকেশন, ডিএনএ-তে টুকরা আকার এবং চার্জ (+ বা -) উপর ভিত্তি করে চাক্ষুষ কৌশল ব্যবহার করে জিন ক্রম সনাক্তকরণ এবং সনাক্তকরণের জন্য অনুমতি দেয়।
নিয়ন্ত্রিত অবস্থার অধীনে, ডিএনএর ছোট অংশ ডিএনএ পলিমারেস নামে পরিচিত এনজাইম দ্বারা উত্পন্ন হয়, যা প্রশংসনীয় ডোক্সাইনিউলাইটিড (ডিএনটিপি) দ্বারা "টেমপ্লেট" নামে পরিচিত ডিএনএ একটি টুকরা যোগ করে। এমনকি ডিএনএর ছোট ছোট টুকরাগুলিকে বলা হয় "প্রাইমারস" পলিমারেজের জন্য একটি প্রাথমিক বিন্দু হিসাবে ব্যবহৃত হয়। প্রাইমার সাধারণত ছোট-ছোট আকারের ডিএনএ (হিলিগোজার) হয়, সাধারণত 15 থেকে 30 নিউক্লিওটাইডের মধ্যে। জিনের শেষ প্রান্তে বর্ধিত ডিএনএ সংকেতগুলি বজায় রাখা বা অনুমান করা হয়। PCR- এর সময়, ক্রমবিশিষ্ট ডিএনএ উত্তপ্ত হয় এবং দ্বিগুণ পৃথক পৃথক হয়। কুলিং এ, প্রাইমারে টেমপ্লেটটি আবদ্ধ (নামকরণ করা হয় annealing) এবং পলিমারেজ শুরু করার জন্য একটি স্থান তৈরি করুন।
পিসিআর টেকনিক
থার্মোফিলিস এবং থার্মোফিলিক পলিমেরেজ এনজাইম আবিষ্কারের মাধ্যমে পলিমেরেজ চেইন রিঅ্যাকশন (পি.সি.আর.) সম্ভব হয়েছিল (উচ্চ তাপমাত্রায় তাপমাত্রার পরে স্ট্রাকচারাল অখণ্ডতা এবং কার্যকারিতা বজায় রাখার জন্য এনজাইম)।
পিসিআর টেকনিকের সাথে জড়িত পদক্ষেপ নিম্নরূপ:
- ডিএনএ টেমপ্লেট, পলিমেরেজ এনজাইম, প্রাইমার্স এবং ড্যান্টিপিএসগুলির অনুকূলিতকরণের সাথে মিশ্রণটি তৈরি করা হয়। এনজাইম বিশ্লেষণ ছাড়াই মিশ্রণ গরম করার ক্ষমতা 94 ডিগ্রি সেলসিয়াসের তাপমাত্রায় ডিএনএ নমুনাের ডাবল হেলিক্সকে অস্বীকার করার ক্ষমতা দেয়।
- নিন্দা পর, নমুনা প্রায় 54 ডিগ্রী, একটি আরো মধ্যপন্থী পরিসীমা ঠান্ডা করা হয়, যা একক ফাঁকা ডিএনএ টেমপ্লেট থেকে primers এর annealing (বাঁধাই) সহজতর।
- চক্রের তৃতীয় ধাপে, নমুনাটি 72 ডিগ্রিতে পুনর্বিন্যাসিত হয়, প্রত্যক্ষকরণের জন্য Taq DNA পলিমারেজের আদর্শ তাপমাত্রা। প্রসারিত হওয়ার পর, ডিএনএ পলিমেরেজ ডিএনএর মূল একক তীরটি একটি প্রম্পট হিসাবে ড্যান্টিএন্টেপমেন্টগুলিকে প্রতিটি প্রাইমারের 3 'প্রান্তিকে সম্পূরক ডিএনটিপিগুলি যুক্ত করে এবং আগ্রহের জিনের অঞ্চলে ডাবল-ভ্রান্ত ডিএনএ'র একটি বিভাগ তৈরি করে।
- প্রাইমারের যে ডিএনএ সিকোয়েন্সগুলি একটি সঠিক ম্যাচ নয়, সেগুলি একজায়গিত করা হয় 72 ডিগ্রি এনিলেল হয় না, এইভাবে সুদীর জিনের প্রসারকে সীমিত করে দেয়।
নির্ণায়ক, প্রক্রিয়াকরণ এবং প্রসারিততা এই প্রক্রিয়া একাধিক (30-40) বার পুনরাবৃত্তি করা হয়, যার ফলে সংশ্লেষিতভাবে সংশ্লেষণকৃত জিনের সংখ্যার সংখ্যা বৃদ্ধি করা হয়। যদিও এই প্রক্রিয়াটি খুব তিক্ত হবে যদি নিজে সঞ্চালন করা হয়, তবে নমুনা প্রস্তুত করা যাবে এবং প্রোগ্রামেবল থার্মোসি্ল্লারের ইনকিউবেট করা যাবে, যা এখন বেশিরভাগ আণবিক ল্যাবরেটরিতে সাধারণ, এবং একটি সম্পূর্ণ PCR প্রতিক্রিয়া 3-4 ঘন্টার মধ্যে করা যেতে পারে।
প্রতিটি ডিস্টিং ধাপ পূর্ববর্তী চক্রের প্রসারিত প্রক্রিয়া বন্ধ করে দেয়, এইভাবে ডিএনএর নতুন প্রান্তটি ছাঁটাই করে এবং এটিকে কাঙ্ক্ষিত জিনের আকারের প্রায়শই রাখে।
সম্প্রতি চক্রের সময়কাল সুদীর জিনের আকারের উপর নির্ভর করে দীর্ঘ বা দীর্ঘস্থায়ী হতে পারে, তবে অবশেষে, PCR এর পুনরাবৃত্ত চক্রগুলির মাধ্যমে, অধিকাংশ টেমপ্লেটই কেবল সুদীর জিনের আকারে সীমিত থাকবে, যেমনগুলি তারা Primers উভয় পণ্য থেকে উত্পন্ন হয়েছে।
সফল PCR জন্য বিভিন্ন কারণ আছে যা ফলাফল উন্নত করতে ব্যবহৃত হতে পারে পিসিআর পণ্যের উপস্থিতি পরীক্ষা করার জন্য সবচেয়ে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত পদ্ধতি হল agarose gel electrophoresis । আকার এবং চার্জ উপর ভিত্তি করে ডিএনএ fragments পৃথক করার জন্য ব্যবহৃত হয়। টুকরা তারপর dyes বা radioisotopes ব্যবহার করে visualized হয়।
বিবর্তন
পিসিআর আবিষ্কারের ফলে মূল ট্যাবের চেয়ে ডিএনএ পলিমারস আবিষ্কৃত হয়েছে। এর মধ্যে কিছু ভাল "প্রুফরিডিং" ক্ষমতা বা উচ্চতর তাপমাত্রায় আরো স্থিতিশীল থাকে, এইভাবে PCR এর নির্দিষ্টতা উন্নত করে এবং ভুল dNTP সন্নিবেশ থেকে ত্রুটিগুলি হ্রাস করে।
PCR- এর কিছু পরিবর্তন নির্দিষ্ট অ্যাপ্লিকেশনের জন্য ডিজাইন করা হয়েছে এবং এখন আণবিক জেনেটিক ল্যাবরেটরিতে নিয়মিত ব্যবহার করা হয়। এইগুলির মধ্যে কয়েকটি হল রিয়েল-টাইম PCR এবং বিপরীত-ট্রান্সক্রিপ্যাট PCR। পিসিআর আবিষ্কার ডিএনএ সিকোয়েন্সিং, ডিএনএ ফিঙ্গারপ্রিন্টিং এবং অন্যান্য আণবিক কৌশলগুলির উন্নতির দিকে পরিচালিত করেছে।