এই বাফার ডিএনএ ইলেক্ট্রোফোরিসিস বিচ্ছেদ জন্য ব্যবহৃত হয়
টিবিই বাফার বিশেষত ছোট ডিএনএ টুকরা (এমএইচডি <1000) আলাদা করার জন্য উপযোগী, যেমন সীমাবদ্ধতা এনজাইম ডাইজেস্টের ছোট পণ্য।
টিবিইর একটি বৃহত্তর বাফারিং ক্ষমতা রয়েছে এবং TAE বাফারের চেয়ে তীব্র রেজোলিউশন দেবে। TAE বাফার ট্রিস বেস, অ্যাসেটিক এসিড এবং EDTA (ট্রিস-অ্যাসেটেট-EDTA) গঠিত একটি সমাধান।
TAE সাধারণত TAE এর চেয়ে বেশি ব্যয়বহুল এবং ডিএনএ ল্যাগেসকে বাধা দেয়, যা পরবর্তী ডিএনএ শুদ্ধকরণ এবং লঘু পদক্ষেপের উদ্দেশ্যে হলে সমস্যা হতে পারে। অনুসরণ করে তিনটি সহজ ধাপগুলি সঙ্গে, শিখুন কিভাবে TBE বাফার করা। এই বাফারটি তৈরি করতে প্রায় 30 মিনিটের বেশি সময় লাগবে না। এখানে কিভাবে:
EDTA এর একটি স্টক সমাধান তৈরি করুন
একটি EDTA (ethylenediamine tetraacetic অ্যাসিড) সমাধান আগে প্রস্তুত করা উচিত সময়। পিডিএইচ 8.0 এর সাথে সামঞ্জস্য না হওয়া পর্যন্ত EDTA সম্পূর্ণরূপে সমাধান করা যাবে না। 0.5 এম EDTA এর 500 মিলিলিটার স্টক সমাধানের জন্য, 93.05 গ্রাম ইডিটিএ ডিসিডিয়াম লবণ (এফডব্লিউ = 37২.2) ভঙ্গ করে। তারপর 400 milliliters deionized জল এটি দ্রবীভূত এবং NaOH সঙ্গে pH সামঞ্জস্য। এর পরে, 500 মিলিলিটারের একটি চূড়ান্ত পরিমাণে সমাধানটি উপরে তুলে ধরুন।
টিবিএর একটি স্টক সমাধান তৈরি করুন
54 গ্রাম ট্রিস বেস (এফডাব্লিউ = 121.14) এবং ২7.5 গ্রাম বোরিক এসিড (এফডব্লিউ = 61.83) এবং ওজনের প্রায় 900 মিলিমিটার ডিওনিয়েড পানি উভয়ই দ্রবীভূত করে TBE- এর একটি ঘনীভূত (5x) স্টক সমাধান করুন। তারপর 0.5 এম EDTA (পিএইচ 8.0) এর 20 মিলিলিটার যোগ করুন এবং এক লিটারের চূড়ান্ত পরিমাণে দ্রবীভূত করুন।
এই সমাধানটি রুমের তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা যেতে পারে কিন্তু পুরনো সমাধানগুলির মধ্যে একটি তরঙ্গায়িত হবে। কাচের বোতল মধ্যে বাফার সঞ্চয় এবং একটি তরলীকরণ গঠিত হয়েছে যদি বাতিল।
টিবিই'র একটি কার্যকরী সমাধান তৈরি করুন
Agarose জেল ইলেক্ট্রোফোরিসিসের জন্য, একটি TBE বাফার 0.5x (মনোযোগিত স্টক 1:10 dilution) একটি ঘনত্ব এ ব্যবহার করা যেতে পারে। ডিয়াইজড ওয়াটারের 10x দ্বারা স্টক সমাধান ঢালা চূড়ান্ত সল্যুশনের পরিমাণ 45 মিমি ট্রিস-বোরেট এবং 1 মি.মি. EDTA। একটি Agarose জেল চলমান ব্যবহার করার জন্য এখন বাফার প্রস্তুত।
তুমি কি চাও
TBE বাফার করতে, আপনাকে মাত্র চার পদার্থ প্রয়োজন হবে। এই তালিকা অবশিষ্ট আইটেম সরঞ্জাম হয়। চারটি পদার্থ প্রয়োজন EDTA disodium লবণ, ট্রিস বেস, boric অ্যাসিড এবং deionized জল।
সরঞ্জাম হিসাবে, উপযুক্ত হিসাবে আপনি একটি pH মিটার এবং ক্রমাঙ্কন মান প্রয়োজন হবে। যে ছাড়াও, আপনার 600 মিলিলিটার এবং 1500 মিলিলিটার পিপা বা বোতলগুলির প্রয়োজন হবে। আপনার সরঞ্জাম প্রয়োজনীয়তা আউট রাউটার স্নাতক সিলিন্ডার এবং বার এবং স্রাব প্লেটগুলি সরাতে।
আপনি শুরু করার আগে আপনার প্রয়োজনীয় সবকিছু আছে তা নিশ্চিত করার জন্য আপনি ব্যবহার করা হবে ল্যাবের তালিকা চেক করুন। সমাধান তৈরির মাঝখানে থাকা বন্ধ করার চেয়েও খারাপ কিছু নেই কারণ আপনি সঠিক উপকরণ থেকে বেরিয়েছেন।
যদি আপনার ল্যাব স্কুলে বা আপনার কাজ সাইটে থাকে, তাহলে সঠিক কর্মীদের সাথে চেক করুন যে তাদের কাছে স্টক সমস্ত আইটেম আছে। এই কাজটি শেষ পর্যন্ত আপনার সময় এবং শক্তি সংরক্ষণ করতে পারে।